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KI法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量

KI法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量

的有关信息介绍如下:

KI法测定水稻幼苗叶片过氧化氢含量

原理:H2O2 存在390nm吸收峰

标准曲线制作

使用eppendorf移液器及进口枪头吸取30.6uL 30%H2O2 加入1L超纯水中,充分混匀为H2O2母液。母液浓度为300μmol/L,即0.3μmol/ml。按照Tab.1加样,充分混匀,在室温(28℃培养箱)下反应1小时,在紫外分光光度计下测量吸光值。注意使用石英比色皿。做出标准曲线。

样品测量

1. 取2ml离心管,加入5粒锆珠,在离心管盖和壁分别记下编号;

2. 称取0.1g叶片,快速剪碎,放入离心管中,迅速投入液氮速冻;

3. 将离心机设置4℃预冷

4. 将匀浆器载物盘置入液氮中速冻,转载好,将离心管放入载物盘中;

5. 60rpm,150s,震荡研磨,重复一次;

6. 取出离心管至于液氮中,分别取出,加入1.5ml 0.1% TCA,快速混匀,置于冰上。

7. 所有样品加完之后,12000rcf,15min,4℃;

8. 取0.5ml上清液到干净的2ml离心管中;

9. 加入0.5ml PBS;

10. 加入1ml KI;

11. 充分震荡,28℃恒温1小时;

12. 390nm 测定吸光值。